細(xì)菌蛋白提取試劑盒（100次） 貨號：RTD8101
● 產(chǎn)品組份及規(guī)格
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產(chǎn)品編號
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名稱
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規(guī)格
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貯存
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運(yùn)輸
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RTD8101-01
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細(xì)菌蛋白提取緩沖液
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100 ml
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4℃
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常溫
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PM1790
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100 mM PMSF（100×）
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10 ml
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RT
（配制后-20℃）
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常溫
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RTD8101-03
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溶菌酶（50mg/ml）
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1 ml
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-20℃
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濕冰
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RTD8101-04
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DNase I（1000U/ml）
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100 μl
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-20℃
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濕冰
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● 產(chǎn)品簡介
細(xì)菌蛋白提取試劑盒使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白提取。提取過程中不需進(jìn)行超聲破碎等復(fù)雜的操作步驟，有效避免了外源蛋白的污染。該試劑盒在抽提試劑的基礎(chǔ)上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制劑PMSF，可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現(xiàn)象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進(jìn)行IP、Western
blot實(shí)驗(yàn)；提取體系中不含EDTA，可直接通過Ni-NTA 等純化填料進(jìn)行蛋白純化。該試劑盒既可適用于小量蛋白表達(dá)檢測，也適用于大量蛋白的表達(dá)純化試驗(yàn)。
每次提取使用1ml
緩沖液計(jì)算，該試劑盒可以使用100次。
● 貯存條件：
試劑組份按照溫度貯存，可保存 12個月。
● 使用方法：
1.
8,000 rpm常溫離心 3 min 后，棄上清，盡量棄除殘余培養(yǎng)基，留取管底部菌體。
2. 即用型提取緩沖液配制：每ml
提取緩沖液中加入10 μl PMSF，10
μl 溶菌酶，1 μl DNase I，混勻后4℃貯存?zhèn)溆谩?b>注：該緩沖液現(xiàn)用現(xiàn)配，不建議貯存。
3. 按照原菌液1/2-1/5體積加入即用型提取緩沖液，即2-5
ml菌液收集的菌體加入1 ml 提取緩沖液，用吸頭吹打至無可見細(xì)胞團(tuán)塊，重懸菌體。
4.
20-37℃孵育 15-20 min，期間輕彈離心管數(shù)次以加速裂解。
注：若蛋白表達(dá)量較低，建議結(jié)合超聲破碎，置冰上后，采用300w，10s
超聲/10s 間隔，超聲20min，至菌液變清亮。
5. 裂解完成后
13,000rpm4℃離心5
min，將上清（上清中即為可溶性蛋白）轉(zhuǎn)移至新的離心管中，直接進(jìn)行下一步純化或檢測實(shí)驗(yàn)。
6.
蛋白提取物分裝后建議-80℃保存。
實(shí)驗(yàn)示例：
